精制(zhi)自制(zhi)培(pei)養基，Qkine因子實現(xian)經濟有效、無(wu)需周末的hiPSC培(pei)養和基因工程

本文內容為Qkine與意大利都靈大學的Armenise-Harvard 心臟工程和發育基因組學實驗室HEDGe的合作研究發表。

HEDGe 與 Qkine 最近合作發表了一篇文章（歡迎聯系我們獲取原文），重點介紹了優化人類誘導性多能干細胞(hiPSC)的培養基，以實現經濟有效、實用且可重復的 hiPSC培養。高質量、可重復且經濟有效的培養對于大規模擴增用于細胞治療的hiPSC尤為重要，應讓不同社會經濟背景的患者均能獲得這種治療。

研(yan)究發現，在(zai)優化(hua)weekend-free hiPSC 培(pei)養(yang)(yang)(yang)培(pei)養(yang)(yang)(yang)基的過(guo)程中， Qkine無(wu)標簽的 FGF2-G3 變(bian)體在(zai)推薦濃(nong)度 40 ng/ml 下效(xiao)力過(guo)強。當(dang)測(ce)試較(jiao)低(di)濃(nong)度時，多能(neng)性(xing)增(zeng)加，這由 NANOG/OCT4 陽性(xing)細胞的數量表明。確(que)定濃(nong)度為 FGF-G3 154 aa (Qk053) 10 ng/ml 和 FGF2-G3 145 aa (Qk052) 5 ng/ml 。除了使(shi)用weekend-free培(pei)養(yang)(yang)(yang)基更換方案降低(di)成(cheng)本(ben)外，FGF2-G3 145 aa 還可將培(pei)養(yang)(yang)(yang)基中FGF-2的成(cheng)本(ben)降低(di)2倍。

·  FGF2-G3 145aa 濃(nong)度 (5 ng/ml) 比(bi)FGF-G3 154aa (10 ng/ml) 低2倍，比(bi)推(tui)薦FGF2 (40 ng/ml) 低8倍。

·  B8+ 優化培養基（完整培養基已發表，表1提前看）含有1ng/ml TGF-β3 (Qk054)、5ng/ml FGF2-G3 145aa (Qk052) 和(he) 0.1 ng/ml NRG-1 (Qk045)

表(biao)1：兩種weekend-free培養基成分的濃度(du)（均基于DMEM/F12）

與市售 E8 培(pei)養(yang)基 (cE8) 和(he)自(zi)制 E8 類培(pei)養(yang)基 (hE8) 相比(bi)，在 B8+ 培(pei)養(yang)基中培(pei)養(yang)的 hiPSC 具(ju)有 NANOG 表(biao)達和(he)基因富集，表(biao)明(ming)其(qi)正向(xiang)中胚層或(huo)內(nei)胚層分化而(er)不是神(shen)經元(yuan)分化發展。然而(er)，盡管(guan)發生了這種(zhong)變化，hiPSC 至少在 10 代中仍保(bao)持多能性。

與 cE8 和(he) hE8 培(pei)(pei)養(yang)基相比，B8+ 還提(ti)高了(le)基因編輯的(de)效率，顯示出(chu)細胞對選擇(ze)程序壓力的(de)適應性(xing)增強(qiang)。所有培(pei)(pei)養(yang)基均能夠支(zhi)持(chi) iPSC 向心肌細胞（一(yi)種中胚層衍(yan)生物）分化(hua)，并添加了(le)激(ji)活素(su) A (Qk001) 和(he) BMP-4 (Qk038) [完整(zheng)培(pei)(pei)養(yang)基已發表(biao)，見文章]。各培(pei)(pei)養(yang)基還支(zhi)持(chi)心臟(zang)類器官(guan)的(de)形(xing)成及其(qi)向 TNNT2+ 心肌細胞的(de)分化(hua)。

·  培養基成本為(wei)B8+約80歐(ou)元/升(sheng)、自(zi)制類E8約100歐(ou)元/升(sheng)，而(er)商用(yong)E8約650歐(ou)元/升(sheng)。（2024年10月人(ren)民幣(bi)與歐(ou)元互兌價格1EUR=8.22CNY）

·  Weekend-free protocol（見下圖1，詳見原文(wen)章）將使培養基(ji)的使用(yong)量減少57%。

圖1：三(san)種不同培養基(ji)中hiPSC培養的每周(zhou)時(shi)間(jian)表。（用(yong)顏(yan)色突出顯示的日期涉(she)及培養基(ji)的更換）

在本出版物中（歡迎聯系我們獲取原文），研究者在常氧條件下測試了不同的培養基，并優化了生長因子濃度，以降低成本并實現Weekend-free培養，同時不影響 hiPSC 的多能性和應用（涉及產品見下列清單圖）。

該方案有助于使(shi)干細胞培養對較(jiao)小(xiao)實(shi)驗(yan)室更(geng)易獲得，并使(shi)大規模基因編輯(ji)實(shi)驗(yan)更(geng)具成(cheng)本效益。

擴展閱(yue)讀

QKineFGF2-G3（二）｜無(wu)需周末(mo)換液的干細胞培養熱穩定(ding)FGF-2（bFGF）

關注曼博生物公(gong)眾號(hao)：Mine-Bio，獲取更(geng)多技術(shu)資(zi)訊(xun)！