產品簡介

InSphero Akura 96/384孔(kong)(kong)超低吸(xi)(xi)附(fu)(fu)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)微(wei)(wei)孔(kong)(kong)板是一種簡單、靈活且能(neng)兼容高通(tong)量和(he)自(zi)動(dong)化系統的(de)操作平臺，用(yong)于(yu)無支架的(de)3D細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)培養(yang)、觀察和(he)觀測。每塊InSphero Akura 96/384孔(kong)(kong)超低吸(xi)(xi)附(fu)(fu)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)微(wei)(wei)孔(kong)(kong)板都是由超低吸(xi)(xi)附(fu)(fu)的(de)培養(yang)孔(kong)(kong)和(he)用(yong)于(yu)減少培養(yang)基蒸發的(de)板蓋組(zu)成(cheng)。適用(yong)于(yu)永生或改良細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)系、原代細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)以及誘導性多能(neng)干細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)（iPS cells）等已知可(ke)以用(yong)于(yu)3D細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)培養(yang)的(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)類型(xing)形成(cheng)類器(qi)官、細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)微(wei)(wei)球體或細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)微(wei)(wei)組(zu)織(zhi)。此外，InSphero Akura 384孔(kong)(kong)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)微(wei)(wei)孔(kong)(kong)板的(de)底部是一層(ceng)透(tou)氣膜，可(ke)以保證長時間培養(yang)時充(chong)足(zu)的(de)氣體交換。

產(chan)品(pin)特色

InSphero Akura 96/384孔(kong)(kong)超低吸附(fu)細(xi)胞(bao)微(wei)孔(kong)(kong)板(ban)(ban)的(de)(de)(de)獨特設計(ji)可以(yi)幫(bang)助客戶(hu)更好地開展高(gao)通(tong)量(liang)的(de)(de)(de)體外(wai)3D細(xi)胞(bao)培養實(shi)驗。從遠處(chu)看(kan)，InSphero Akura 96/384孔(kong)(kong)細(xi)胞(bao)微(wei)孔(kong)(kong)板(ban)(ban)和普通(tong)的(de)(de)(de)細(xi)胞(bao)微(wei)孔(kong)(kong)板(ban)(ban)的(de)(de)(de)外(wai)觀沒有明(ming)顯不同，尺寸符合SLAS/ANSI標準，可以(yi)完(wan)美兼(jian)容(rong)常規的(de)(de)(de)實(shi)驗操作(zuo)以(yi)及儀器。

從(cong)近處觀察，便可(ke)以(yi)發現其(qi)創新型設計的(de)微(wei)(wei)妙之處：微(wei)(wei)孔(kong)(kong)(kong)板(ban)中(zhong)的(de)每個(ge)孔(kong)(kong)(kong)都(dou)擁有類似“倒置煙囪(cong)”的(de)形狀(zhuang)以(yi)及一個(ge)被稱為(wei)“SureXchange ledge”的(de)吸(xi)(xi)頭停靠(kao)處以(yi)便于更換培養(yang)基。InSphero Akura 96孔(kong)(kong)(kong)細胞(bao)(bao)微(wei)(wei)孔(kong)(kong)(kong)板(ban)的(de)吸(xi)(xi)頭停靠(kao)處呈軸對稱，而InSphero Akura 384孔(kong)(kong)(kong)細胞(bao)(bao)微(wei)(wei)孔(kong)(kong)(kong)板(ban)只有單(dan)側的(de)吸(xi)(xi)頭停靠(kao)處。在更換培養(yang)基時，只需要將吸(xi)(xi)頭的(de)尖部停靠(kao)在這里，便能得到一個(ge)合適的(de)觸覺反饋，避免(mian)將吸(xi)(xi)頭伸入過深的(de)位置而對培養(yang)的(de)細胞(bao)(bao)微(wei)(wei)球產生影響。微(wei)(wei)孔(kong)(kong)(kong)板(ban)的(de)培養(yang)孔(kong)(kong)(kong)壁有一層(ceng)耐用(yong)的(de)涂(tu)層(ceng)，可(ke)以(yi)有效防止細胞(bao)(bao)微(wei)(wei)球體在培養(yang)的(de)過程中(zhong)發生附著。

InSphero Akura 384孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)細胞微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板(ban)(ban)(ban)由24列(lie)、16行(xing)(xing)培(pei)養孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)構成，列(lie)由數字(zi)1-24表示，行(xing)(xing)由字(zi)母(mu)A-P標(biao)識(shi)，孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)A1標(biao)識(shi)整(zheng)板(ban)(ban)(ban)左上角(jiao)的(de)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)，而P1標(biao)識(shi)整(zheng)板(ban)(ban)(ban)左下角(jiao)的(de)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)，由A1和(he)P1孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)可以確定整(zheng)塊微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板(ban)(ban)(ban)的(de)方(fang)向（圖(tu)2）。InSphero Akura 384孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)細胞微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板(ban)(ban)(ban)的(de)培(pei)養孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)結構是(shi)非對稱的(de)，吸頭停(ting)靠(kao)處位于培(pei)養孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)靠(kao)近(jin)(jin)微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板(ban)(ban)(ban)上側的(de)位置，而供細胞微(wei)球體生(sheng)(sheng)長(chang)的(de)空穴位于培(pei)養孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)靠(kao)近(jin)(jin)微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板(ban)(ban)(ban)下側的(de)位置。在使用InSphero Akura 384孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)細胞微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板(ban)(ban)(ban)時應(ying)特別注意微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板(ban)(ban)(ban)的(de)方(fang)向，避免(mian)不正(zheng)當的(de)操作對實(shi)驗結果產(chan)生(sheng)(sheng)影響。

產品優(you)勢(shi)

1. 利用超低(di)吸(xi)附的微(wei)孔(kong)板中便捷地獲得細(xi)胞(bao)自聚集形(xing)成的細(xi)胞(bao)微(wei)球

2. 獨特(te)的培養孔(kong)設(she)計使得更換培養基(ji)的過(guo)程更加(jia)輕(qing)松，可以有效(xiao)避免細(xi)胞(bao)長(chang)期培養時因為更換培養基(ji)導致的細(xi)胞(bao)微(wei)球的丟失或損傷

3. 培養孔的底(di)(di)(di)部(bu)設有直徑為1mm的平底(di)(di)(di)觀察(cha)窗，可以(yi)方便地進行細胞微球(qiu)的定位和觀察(cha)，避免了一般圓底(di)(di)(di)ULA板成像(xiang)時的局部(bu)變形(xing)

4. InSphero Akura 384孔細(xi)胞微孔板可以與更先進(jin)的成像和(he)自動化液體處理(li)系統(tong)兼容以開展高(gao)通(tong)量實驗(yan)，培養孔獨特的黑色壁體可以有效(xiao)消除孔間的熒光串擾

自備材料

1. 實驗細胞與合適的培養基

2. 倒置顯微鏡

3. 細胞計數(shu)工具(ju)

4. 移液器(qi)/自(zi)動化液體處理(li)系(xi)統

5. 板(ban)孔離心(xin)機

6. 二氧化碳培養(yang)箱(xiang)（設(she)置為5%濃(nong)度(du)二氧化碳，95%相對濕度(du)，37攝氏度(du)）

實驗前(qian)準備

1. 培(pei)養(yang)基于37攝氏度預熱

2. 用70%乙醇擦(ca)拭微孔板的外(wai)包裝

3. 在無菌操作(zuo)環境下(xia)小心(xin)地(di)打開微孔板的外(wai)包裝(zhuang)

實驗步(bu)驟

預濕潤

* 推薦(jian)在無菌(jun)操作環境下執行預潤濕的操作，可(ke)以(yi)有效防(fang)止培養孔(kong)中(zhong)的氣泡產生。

1. 向孔內加入40uL含(han)有(you)FCS或BSA的(de)(de)培養(yang)基，加入時(shi)注意使移(yi)液器的(de)(de)吸頭盡量靠(kao)近培養(yang)孔的(de)(de)底部，但(dan)是(shi)注意不要觸碰到培養(yang)孔的(de)(de)底部（對于InSphero Akura 96孔細胞微孔板，推薦使用8/12通道移(yi)液器以縮短操作(zuo)時(shi)間）。

2. 使用移液器(qi)吹(chui)洗培養(yang)基以濕潤培養(yang)孔，此(ci)步驟應(ying)小心操作避免產生氣泡。

3. 將吸頭停靠在培養孔內的吸頭停靠處（此處非常重要，請仔細參考前文的“產品特色”部分，不正確的操作可能會損壞微孔板并影響其性能），將孔內的所有培養基吸出（根據微孔板的設計，InSphero Akura 96孔細胞微孔板將殘留少于5-7uL的培養基，InSphero Akura 384孔細胞微孔板將殘留少于2-3uL的培養基，可以忽略不記）。

細胞接種(zhong)

1. 依據實驗(yan)設計，將要(yao)接種的(de)細胞(bao)或細胞(bao)混(hun)合(he)物制備成單細胞(bao)懸液。

2. 使(shi)用血球計數板或其他合適(shi)(shi)的細(xi)胞計數工(gong)具進(jin)行細(xi)胞計數，并確定合適(shi)(shi)的細(xi)胞接種密(mi)度。

3. 使用移液器充分吹洗細胞懸液，確保懸液中的細胞均勻分布，并取合適數量的細胞，用培養基將體積補足70uL（InSphero Akura 96孔細胞微孔板）/50uL（InSphero Akura 384孔細胞微孔板）。

* 推薦的細(xi)胞接(jie)種密(mi)度：用(yong)于增(zeng)殖細(xi)胞的長期培(pei)養(yang)，建(jian)議使用(yong)較(jiao)低(di)的起始(shi)密(mi)度，建(jian)議每(mei)孔(kong)接(jie)種250-500細(xi)胞；用(yong)于非增(zeng)殖細(xi)胞的培(pei)養(yang)或需(xu)要快(kuai)速(su)獲得較(jiao)大體積的細(xi)胞微(wei)球體，建(jian)議每(mei)孔(kong)接(jie)種2500-25000細(xi)胞。

4. 緩慢地將細胞液接入微孔板上對應的培養孔中，該過程應盡量保持輕柔（移液速度小于10uL/sec），并盡量避免吸頭觸碰培養孔的底部。

細胞(bao)沉降和(he)細胞(bao)微球體形成

* 為(wei)了達到更佳的實驗(yan)效(xiao)果，可(ke)能需要優化(hua)細(xi)(xi)胞培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)的條(tiao)件(jian)(jian)，例如：調整細(xi)(xi)胞接種密度或(huo)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基成分，或(huo)通(tong)過添(tian)加支持(chi)細(xi)(xi)胞（supporting cells，如基質分泌(mi)細(xi)(xi)胞）或(huo)添(tian)加劑（如ECM），對于(yu)初次(ci)開展3D培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)的細(xi)(xi)胞類型，建(jian)議嘗試多種的細(xi)(xi)胞培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)條(tiao)件(jian)(jian)。

1. 將(jiang)InSphero Akura 96/384孔細胞微孔板蓋好蓋子并放入板孔離心機中，250 x g（RCF）離心2min。

* 該離心步驟是選做步驟，不過短(duan)暫(zan)的離心可以幫助去除培養孔內的殘(can)留氣泡并幫助細胞沉(chen)降(jiang)至(zhi)培養孔的底部以促進細胞微球體的生成(cheng)。

2. 將InSphero Akura 96/384孔細胞(bao)微孔板移入(ru)二氧(yang)化碳培(pei)養箱(xiang)中，并將InSphero Akura 96/384孔細胞(bao)微孔板傾斜(xie)30°放(fang)置(zhi)或使用(yong)InSphero Akura傾斜(xie)支架（CS-10-002-00），以(yi)促(cu)進細胞(bao)微球(qiu)體的形成。

3. 在適宜的條(tiao)件(jian)下培養2-5天，每(mei)天觀察細胞微(wei)球體的形態(tai)，并在需要時更換培養基。

培養基更換

* 通(tong)常(chang)情(qing)況(kuang)下，細胞(bao)微球體(ti)的培養每周需(xu)要更換2-3次培養基，具體(ti)更換頻率依據實際情(qing)況(kuang)而定(ding)

1. 將InSphero Akura 96/384孔(kong)細胞(bao)微孔(kong)板從二(er)氧化碳培養(yang)箱中取(qu)出，并以(yi)合適的方向(xiang)擺放（尤其是(shi)對(dui)于(yu)InSphero Akura 384孔(kong)細胞(bao)微孔(kong)板）。

2. 將移(yi)液器的(de)(de)吸頭(tou)(tou)沿(yan)著孔壁慢慢下滑直至感受到(dao)吸頭(tou)(tou)停(ting)靠處帶來的(de)(de)觸覺反饋(kui)，并將培(pei)養孔內的(de)(de)培(pei)養基(ji)完全(quan)吸出（除(chu)了培(pei)養孔深處殘留的(de)(de)微量培(pei)養基(ji)），此步驟應盡量輕緩，建議(yi)的(de)(de)移(yi)液速度(du)小于10-20uL/sec。

3. 將(jiang)移(yi)液(ye)器的(de)吸(xi)(xi)頭沿著(zhu)孔(kong)壁慢(man)慢(man)下滑直至感(gan)受到吸(xi)(xi)頭停靠處帶來的(de)觸覺反饋，并加入70uL（InSphero Akura 96孔(kong)細(xi)胞(bao)微孔(kong)板(ban)）/50uL（InSphero Akura 384孔(kong)細(xi)胞(bao)微孔(kong)板(ban)）預熱的(de)新培養基，此步驟應盡量(liang)輕緩，建議(yi)的(de)移(yi)液(ye)速度小于10-20uL/sec（對(dui)于InSphero Akura 96孔(kong)細(xi)胞(bao)微孔(kong)板(ban)，移(yi)液(ye)速度可以(yi)適(shi)當放寬(kuan)至小于50uL/sec）。

4. 如果要求(qiu)更(geng)加徹底的培(pei)養基(ji)更(geng)換，可(ke)以重復第3-4步。

5. 將InSphero Akura 96/384孔細(xi)胞(bao)微孔板(ban)放回(hui)二氧化碳培養(yang)箱中繼(ji)續培養(yang)。

* 如(ru)需要了(le)解更多操作(zuo)細節或使用(yong)自動化液體(ti)處理(li)系(xi)統，請聯系(xi)曼博生物技(ji)術支持。

細胞(bao)微球體收取(qu)或轉移-InSphero Akura 96孔細胞(bao)微孔板

1. 在收取細(xi)胞微(wei)(wei)球(qiu)(qiu)體之前(qian)，使(shi)用至(zhi)少60uL的(de)100% FCS預(yu)濕(shi)潤(run)吸頭(tou)，該步驟(zou)可以有效防止細(xi)胞微(wei)(wei)球(qiu)(qiu)體黏附(fu)在吸頭(tou)內側。

2. 方案一：使用1000uL的移液器和吸頭，沿著培養孔側壁緩緩往下移動直到感受到觸覺反饋，此時吸頭的尖部正好位于細胞微球體的上側，可以直接吸取細胞微球體。

* 1000uL的吸頭尖部直徑略微大于培養孔的底部直徑，所以可以避免在吸取細胞微球體時對其造成擠壓。

3. 方案二：使用100-200uL的移液器和吸頭，小心保持一個較小的角度并沿著培養孔側壁緩緩往下移直至觸碰到培養孔底部，吸取細胞微球體。

* 100-200uL的吸頭尖部小于培養孔的底部直徑，如果不能保持一個較小的傾斜角度可能會導致吸取過程中細胞微球體的擠壓受損。

4. 將細胞微球體轉移至(zhi)合適(shi)的容器中。

細胞微球體收取(qu)或轉移-InSphero Akura 384孔細胞微孔板

1. 在收取細胞微球(qiu)(qiu)體之前，使用至少(shao)50uL的100% FCS預濕潤吸(xi)頭(tou)(tou)，該步(bu)驟(zou)可以(yi)有效防止細胞微球(qiu)(qiu)體黏附在吸(xi)頭(tou)(tou)內側。

2. 單個細(xi)胞(bao)微球體的(de)(de)收取(qu)：使用(yong)1000uL的(de)(de)移(yi)液器和加長的(de)(de)吸(xi)(xi)頭(tou)（如(ru)1250uL吸(xi)(xi)頭(tou)），沿(yan)著培養孔(kong)側壁（靠近板孔(kong)下(xia)側的(de)(de)一(yi)側，即吸(xi)(xi)頭(tou)停靠處(chu)的(de)(de)對側）緩(huan)緩(huan)往下(xia)移(yi)動直到(dao)感受到(dao)觸覺(jue)反饋，此時吸(xi)(xi)頭(tou)的(de)(de)尖部(bu)正好位于細(xi)胞(bao)微球體的(de)(de)上側，可以直接吸(xi)(xi)取(qu)細(xi)胞(bao)微球體。

3. 連(lian)(lian)續細(xi)胞(bao)微球(qiu)體的(de)(de)吸取：InSphero Akura 384孔細(xi)胞(bao)微孔板可(ke)以支(zhi)持連(lian)(lian)續的(de)(de)吸取。如需要(yao)進行連(lian)(lian)續細(xi)胞(bao)微球(qiu)體的(de)(de)吸取，在實驗開始前需要(yao)使用130uL的(de)(de)100% FCS預(yu)濕(shi)潤吸頭(tou)。詳細(xi)的(de)(de)操(cao)作細(xi)節，請聯系曼博(bo)生物技術支(zhi)持。