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重組(zu)人白細(xi)(xi)胞(bao)(bao)介(jie)素2(rhIL-2)能夠促進(jin)(jin)活化的(de)(de)(de)(de)T細(xi)(xi)胞(bao)(bao)增殖，長(chang)(chang)期以來被用(yong)于(yu)(yu)體內刺激和維持效應(ying)T細(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)生(sheng)長(chang)(chang)，并越來越多地用(yong)于(yu)(yu)體外(wai)擴(kuo)增T細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(包(bao)括基(ji)因(yin)工(gong)程CAR-T細(xi)(xi)胞(bao)(bao))，以用(yong)于(yu)(yu)癌癥患者的(de)(de)(de)(de)過(guo)繼細(xi)(xi)胞(bao)(bao)治(zhi)療(liao)。IL-2于(yu)(yu)1992年被FDA批(pi)準用(yong)于(yu)(yu)治(zhi)療(liao)轉移性(xing)腎癌，并于(yu)(yu) 1998年用(yong)于(yu)(yu)治(zhi)療(liao)轉移性(xing)黑色(se)素瘤。然而，其批(pi)準劑(ji)量(liang)的(de)(de)(de)(de)使用(yong)具(ju)有嚴(yan)重的(de)(de)(de)(de)副作用(yong)，包(bao)括血管毒性(xing)。當低劑(ji)量(liang)給藥時(shi)，IL-2已(yi)被證(zheng)明(ming)可以促進(jin)(jin)CD4+調節(jie)性(xing)T細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(Treg)的(de)(de)(de)(de)選擇性(xing)激活和擴(kuo)增，并促進(jin)(jin)免(mian)疫耐受性(xing)，且幾(ji)乎(hu)沒有全(quan)身(shen)毒性(xing)。最近為(wei)改(gai)進(jin)(jin)現有的(de)(de)(de)(de)市售產品如(ru)Proleukin(aldesleukin)所做的(de)(de)(de)(de)努力，包(bao)括對分(fen)子(zi)的(de)(de)(de)(de)基(ji)因(yin)修飾、融合蛋白的(de)(de)(de)(de)開發和低劑(ji)量(liang)配方的(de)(de)(de)(de)開發。

Akron生(sheng)產rhIl-2用(yong)(yong)于(yu)體(ti)外(wai)研究(jiu)。該(gai)產品已用(yong)(yong)于(yu)幾種臨床和(he)商業的(de)CAR-T療法中(zhong) 。此外(wai)，該(gai)公司還(huan)在尋求(qiu)注(zhu)冊一種新型的(de)、低(di)劑量的(de)rhIL-2制劑，用(yong)(yong)于(yu)治療異基(ji)因造血干細胞移(yi)(yi)植后的(de)急性(xing)和(he)慢性(xing)移(yi)(yi)植物抗宿主病GVHD患者(zhe)。通過與(yu)Dana-Farber癌癥研究(jiu)所(suo)的(de)合作研究(jiu)，證實了Proleukin(aldesleukin)和(he)Akron的(de)rhIL-2的(de)功能(neng)上(shang)的(de)相似性(xing)，支持了該(gai)產品在體(ti)外(wai)使(shi)用(yong)(yong)的(de)實用(yong)(yong)性(xing)。

為了檢測IL-2信(xin)號轉導，在用(yong)(yong)IL-2進行(xing)體(ti)外刺激(ji)之(zhi)前，對從健(jian)康供體(ti)中(zhong)新鮮分離的(de)PBMC用(yong)(yong)表面抗體(ti)進行(xing)染(ran)色(se)。洗滌后，細(xi)胞(bao)在添加2%FBS的(de)預(yu)熱PBS中(zhong)，37℃，5%CO2下孵育(yu)15分鐘，然后用(yong)(yong)不(bu)同(tong)濃度的(de)IL- 2，37℃刺激(ji)15分鐘。刺激(ji)后立即用(yong)(yong)Cytofix固定(ding)(ding)緩沖液將細(xi)胞(bao)固定(ding)(ding)以(yi)停止信(xin)號轉導并進行(xing)細(xi)胞(bao)內標記染(ran)色(se)。

淋巴細胞亞群鑒定

CD25, CD122, CD132, CTLA-4, PD-1, PD-L1在各淋巴細胞亞群中的表達

Akron IL-2、Proleukin刺激(ji)15min后pSTAT5的表達

Akron IL-2或Proleukin刺激15min后(hou)pSTAT5,3,1的(de)表(biao)達（n=6）

LC MS (ESI)—表(biao)明Akron和Proleukin具有相同(tong)的一(yi)級結構和正確的二硫鍵

紫(zi)外吸(xi)收(shou)光譜(pu)、圓(yuan)二色光譜(pu)和熒光發射(she)光譜(pu)均顯(xian)示Proleukin和Akron IL-2具(ju)有(you)相似(si)的二級(ji)和三級(ji)結構。

UV

CD

Fluorescence

Proleukin和Akron IL-2的分子量在還原性和非還原性SDS-PAGE下是一致的

總結

1. 用(yong)不(bu)(bu)同濃度的(de)rhIL-2刺激(ji)健(jian)康(kang)供(gong)體PBMC 15min，隨后用(yong)CyTOF進行分析，為不(bu)(bu)同IL-2產(chan)品的(de)功能(neng)比較(jiao)提供(gong)了一種(zhong)方法。

2. 在(zai)(zai)低濃(nong)度的rhIL-2(5-10IU/ml)刺(ci)激(ji)下，記憶(yi)和初始(shi)Treg細(xi)胞被選擇性激(ji)活(huo)，僅檢測到pSTAT5。在(zai)(zai)高濃(nong)度rhIL-2(100-1000IU/ml)刺(ci)激(ji)下，除(chu)CD4+Treg外，CD4+Tcon和CD8+T細(xi)胞的記憶(yi)亞(ya)(ya)群(qun)(qun)也被激(ji)活(huo)。在(zai)(zai)所有的T細(xi)胞亞(ya)(ya)群(qun)(qun)中，IL-2信號(hao)通(tong)路主要是通(tong)過(guo)pSTAT5介導的，而(er)不激(ji)活(huo)STAT1或STAT3。對6個健康(kang)供(gong)體的結果進行總結，Proleukin和Akron IL-2對T細(xi)胞體外刺(ci)激(ji)無(wu)任(ren)何差異(yi)。

3. 通過(guo)質譜(pu)、紫外吸收光(guang)譜(pu)、圓二色光(guang)譜(pu)、熒光(guang)發(fa)射光(guang)譜(pu)、還原性(xing)和非還原性(xing)條件下(xia)SDS-PAGE分析Proleukin和Akron rhIL-2的結構，發(fa)現兩者的分子量無顯zhu差異。

4. 本研究證(zheng)明Akron的(de)rhIL-2在結構和功能上與(yu)Proleukin相似，驗(yan)證(zheng)了(le)其用于(yu)過繼免疫療(liao)法生產的(de)用途，并可能用于(yu)治(zhi)療(liao)免疫炎癥性(xing)疾病(bing)患(huan)者。這些應用可能包括治(zhi)療(liao)移植(zhi)物抗宿主病(bing)(GVHD)和各種自(zi)身免疫性(xing)疾病(bing)。

Akron 細胞因(yin)子(zi)系列產品

更多產品的DMF以及eCTD MFs文件將完成(cheng): rHu G-CSF, rHu GM-CSF, rHu bFGF, rHu SCF, rHu IL-12, rHu IL-18, rHu PDGF-BB, 人AB血清(qing)(無動物源， 病毒滅活), 人纖連蛋白溶(rong)液(病毒滅活)