發布時間：2025/05/27 點擊數：204 肝細(xi)胞是肝臟的(de)(de)(de)(de)主要(yao)功(gong)能(neng)細(xi)胞，承擔多種關(guan)鍵功(gong)能(neng)，尤其(qi)(qi)是外(wai)源物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)代謝(xie)與解毒作(zuo)(zuo)用。細(xi)胞色素(su)P450酶群（CYPs）是其(qi)(qi)中(zhong)一(yi)種重(zhong)要(yao)的(de)(de)(de)(de)藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)代謝(xie)酶，主要(yao)負責藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)第(di)一(yi)階段代謝(xie)。在藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)開發過(guo)(guo)程中(zhong)，體(ti)外(wai)肝臟模型(xing)至關(guan)重(zhong)要(yao)，能(neng)幫(bang)助識別藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)性(xing)質(zhi)及其(qi)(qi)代謝(xie)物(wu)(wu)(wu)。然而，原代肝細(xi)胞在培養過(guo)(guo)程中(zhong)容易迅速(su)去(qu)分(fen)化，導致P450酶活(huo)性(xing)及藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)代謝(xie)能(neng)力的(de)(de)(de)(de)喪失。近年來，研究者(zhe)們通過(guo)(guo)多種方法延緩細(xi)胞去(qu)分(fen)化，或(huo)使(shi)用干細(xi)胞衍(yan)生的(de)(de)(de)(de)肝細(xi)胞作(zuo)(zuo)為替代模型(xing)，以保持(chi)其(qi)(qi)功(gong)能(neng)特性(xing)。
iPSC衍生肝臟類器官在使用WellReady儲存時能夠維持其高活力、結構和功能
iPSC衍生的小鼠肝臟類器官在Matrigel基質包被的48孔板中培養。一旦成熟，這些類器官通過WellReady在20°C下儲存5天。釋放后，類器官維持了高活力，持續生長，并保持3D結構及肝臟標志物的表達。經過72小時的培養后，類器官仍保留了功能性活躍的藥物代謝酶（見圖1）。
圖1. 從WellReady中釋放(fang)后，將肝(gan)臟類器(qi)官(guan)回(hui)復并培養72小時，然(ran)后進行實驗。
a：類器官被(bei)返回培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)過(guo)夜后，使(shi)用calcein-AM（CAM，綠色(se)）和ethidium homodimer-1（EthD-1，紅色(se)）染(ran)料染(ran)色(se)，分別可視化活細胞和死細胞。
b：類器官返回培養基中培養過(guo)夜后，經過(guo)固定(ding)，并用肝(gan)細胞和膽管(guan)細胞標志(zhi)物-細胞角蛋白-19（CK19，綠色）和Hoechst核染色（藍(lan)色）進行染色。
ci：使(shi)用CellTiter-Glo試劑(ji)盒測量ATP水平(ping)以評(ping)估細胞(bao)活力。
cii：通過P450-Glo CYP1A2試劑盒測量細胞(bao)色(se)素P450 1A2的活性(xing)(xing)，以(yi)評估其(qi)功能性(xing)(xing)活性(xing)(xing)。 圖例指示了釋放(fang)后的培養時間，標尺代表100μm。
原代肝細胞在使用WellReady儲存時，保持其代謝活性和藥物代謝能力
原代肝細胞接種在基質細胞飼養層上培養。細胞通過WellReady封裝，并在37°C下儲存7天。釋放后，細胞被返回標準培養基中過夜。代謝活性（作為細胞活性的指標）和細胞色素P450活性（作為細胞功能的指標）在保存后得以保持（見圖2）。
圖2. WellReady對原代肝細胞(bao)保(bao)存的影響。原代肝細胞在37°C下使用WellReady保存7天。保存后，肝(gan)細胞從WellReady中釋放，并返回培養(yang)基中過夜，隨(sui)后進行實驗。
a：通過alamarBlue熒光法(fa)評估肝細胞的代(dai)謝(xie)活性。
b：使用P450-Glo試劑盒測(ce)量細胞色素P450的活性。
c：通過明場顯微鏡(jing)（左圖）和calcein-AM（CAM，綠色(se)）染色(se)的細胞（右圖）來可視化活細胞。
隨(sui)著(zhu)細胞(bao)和細胞(bao)模型復雜性的不(bu)斷增加，目的是提(ti)高它們(men)(men)的生理相(xiang)關(guan)性。但問題在(zai)(zai)于，隨(sui)著(zhu)模型復雜性的增加，它們(men)(men)變得(de)更(geng)難以培養且(qie)更(geng)脆弱。如(ru)果它們(men)(men)更(geng)脆弱，這(zhe)(zhe)意(yi)味著(zhu)它們(men)(men)更(geng)難冷(leng)凍(dong)，且(qie)從供應(ying)商處(chu)或(huo)不(bu)同地點之間運(yun)送也更(geng)加困難。因此(ci)，這(zhe)(zhe)些(xie)細胞(bao)模型只能在(zai)(zai)具備培養技術的地方使用，限制了整(zheng)個組織的使用范圍。基(ji)本(ben)上(shang)，這(zhe)(zhe)些(xie)模型無法在(zai)(zai)不(bu)同地點之間運(yun)輸(shu)。
使用WellReady在低溫儲存期(qi)間保護工程組織
1. 使用WellReady在(zai)低(di)溫(wen)儲存期間保護工程組(zu)織
?? 3D打印(yin)結構和(he)工程組織
?成(cheng)復(fu)雜(za)的(de)(de)三維(wei)(wei)（3D）?物(wu)材(cai)料，能夠重現細(xi)(xi)胞的(de)(de)空間(jian)?為(wei)，對于(yu)?理相關(guan)的(de)(de)藥物(wu)篩選和(he)組(zu)織(zhi)(zhi)制造十(shi)分重要。3D?物(wu)打(da)印是實現這一目標的(de)(de)?種?法(fa)，通(tong)過將含細(xi)(xi)胞的(de)(de)?物(wu)墨?擠壓(ya)成(cheng)三維(wei)(wei)結(jie)構。其他?法(fa)包括(kuo)組(zu)織(zhi)(zhi)模板(ban)和(he)特定的(de)(de)培養條件，這些(xie)條件促(cu)進基質的(de)(de)沉積/排(pai)列，從??成(cheng)類似于(yu)體(ti)內結(jie)構的(de)(de)組(zu)織(zhi)(zhi)。
2. 使用WellReady運輸3D打印結構和工程微組織(zhi)
在(zai)(zai)(zai)運(yun)(yun)輸3D生(sheng)物(wu)構(gou)建(jian)體(ti)時，保持(chi)其三維結(jie)構(gou)十分重要，且細胞(bao)需要在(zai)(zai)(zai)其支持(chi)基(ji)(ji)質中保持(chi)活力并生(sheng)長。在(zai)(zai)(zai)這里，含MSC（間充質干細胞(bao)）的構(gou)建(jian)體(ti)從瑞典(dian)通過WellReady 96孔板在(zai)(zai)(zai)室溫下(xia)運(yun)(yun)輸到英國，并成功地進行了后續培(pei)養（a）。WellReady在(zai)(zai)(zai)24孔板中保存(cun)了工(gong)程化的心臟和(he)骨骼(ge)肌微(wei)組(zu)織，經(jing)后續培(pei)養后，其恢復了收縮性(xing)和(he)藥物(wu)反(fan)應性(xing)（b）。Atelerix的技術提供的結(jie)構(gou)和(he)生(sheng)理化學支持(chi)可以(yi)保護脆弱組(zu)織，包(bao)括由細胞(bao)自(zi)身基(ji)(ji)質組(zu)裝生(sheng)成的角膜基(ji)(ji)質構(gou)建(jian)體(ti)（c）。
圖3. 通過(guo)WellReady對3D?物打印構建體、?臟和?骼肌?程化微組織以及?膜基質組織構建體進行(xing)儲存(cun)與(yu)運輸，并對封裝(zhuang)細(xi)胞進?共聚焦成像(xiang)。
a：通過WellReady在(zai)室溫下運輸(shu)7天后(hou)的(de)?髓來(lai)源的(de)間充質(zhi)?細胞(bao)（BM-MSCs）和兩種(zhong)不同?物墨? （GelMA和GelXG）組成的(de)3D打印構建體的(de)活/死細胞(bao)（CAM/EthD-1）活?評(ping)估。結果顯? 從 WellReady釋(shi)放后(hou)j經過7天的(de)培(pei)養(yang)，細胞(bao)的(de)??和結構維持明顯。
bi：由iPSC來源的(de)(de)?肌細(xi)胞(bao)和?類?室成纖維細(xi)胞(bao)組成的(de)(de)?程化(hua)?臟組織，在WellReady中室溫儲存2天后，其完全恢復了(le)收縮性(xing)?為，并在處理后24?時呈現(xian)出對(dui)異丙腎上腺(xian)素的(de)(de)正常反(fan)應。
bii：在(zai)WellReady中室(shi)溫儲存3天的來(lai)源于?類?骼肌(ji)的?程化微組織，在(zai)培養恢(hui)復3天后，其恢(hui)復了完全的收縮性?為。
c：?膜基質構建體封(feng)裝(zhuang)并在室溫下儲存(cun)3天后，通(tong)過活死細(xi)胞(bao)（CAM/EthD-1）活?染?進(jin)?評估。結果顯?WellReady封(feng)裝(zhuang)減少了未封(feng)裝(zhuang)時觀察到的(de)細(xi)胞(bao)損(sun)失(shi)a：完整(zheng)的(de)技術說明可參?Jaiswal等?，2021。
【b：數據改編?Luttrell等?，2023 [技(ji)術(shu)海(hai)報(bao)]。 c：關于成像的更(geng)多(duo)信息，請參考Swioklo等?，Proc. Biochem., 59 (Part B), 289 (2017)】
WellReady產品大致使用流程
Atelerix開發(fa)了6個系列(lie)主要(yao)產品，在超過70多種(zhong)生物(wu)樣(yang)本中經過驗證，保護(hu)脆弱細(xi)胞和復雜的細(xi)胞模型，維持樣(yang)本活力(li)、功(gong)能和完(wan)整性。詳(xiang)情推薦閱讀(du): 《曼博生物(wu)代理英國Atelerix，助力(li)新鮮(xian)樣(yang)本常溫保存和運輸長(chang)達2周！》
Atelerix產品特點及優勢總結
? 海藻酸鹽(yan)?凝?技術封裝，通過低溫保(bao)護、抗氧(yang)化劑配方(fang)(fang)、穩定細胞膜(mo)等(deng)方(fang)(fang)式，延長(chang)新鮮生物樣(yang)本保(bao)質期長(chang)達(da)2周
? 天(tian)然、?毒、可再?、無(wu)外源、符合(he)GMP標準
? 90%以上樣(yang)本常溫(wen)運輸(shu)，提高供應鏈靈(ling)活性(xing)
? 維持樣本(ben)性(xing)(xing)能，零妥協：保護(hu)脆弱細胞、復雜的3D類器官結(jie)構(gou)和模型，保持生理相關性(xing)(xing)，維持樣本(ben)活力、功能和完(wan)整性(xing)(xing)
? 簡(jian)單易(yi)操作、容易(yi)驗證：快速、無縫融(rong)入SOP
? 適合珍(zhen)貴、對冷凍敏(min)感、易(yi)損傷的生物(wu)樣(yang)本
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