Qkine FGF2-G3介紹

FGF2-G3是FGF-2的(de)(de)(de)高度生物(wu)活(huo)性和熱穩(wen)定(ding)（耐熱）的(de)(de)(de)改(gai)良型，用(yong)于(yu)支持同(tong)質(zhi)均勻和可重(zhong)復(fu)的(de)(de)(de)干細胞培(pei)養， 同(tong)時避(bi)免了(le)頻繁(fan)更換(huan)培(pei)養基的(de)(de)(de)需(xu)要。野(ye)生型FGF-2天(tian)然(ran)不穩(wen)定(ding)，易于(yu)蛋白(bai)酶降解和聚集(ji)，導(dao)致在(zai)培(pei)養基中的(de)(de)(de)半衰期短（<10小時），需(xu)要頻繁(fan)更換(huan)培(pei)養基，以及培(pei)養過程中的(de)(de)(de)變異。FGF2-G3經過了(le)九(jiu)個氨基酸替換(huan)的(de)(de)(de)改(gai)良，以增強穩(wen)定(ding)性而不影響生物(wu)活(huo)性。這(zhe)將(jiang)蛋白(bai)質(zhi)的(de)(de)(de)功能半衰期從(cong)野(ye)生型的(de)(de)(de)<10小時提高到培(pei)養基中的(de)(de)(de)＞7天(tian)（FGF2-G3）。使用(yong)熱穩(wen)定(ding)的(de)(de)(de)FGF2-G3提供了(le)一種改(gai)良的(de)(de)(de)替代方案，節省了(le)研究(jiu)人員寶貴的(de)(de)(de)時間和金錢，減少(shao)了(le)培(pei)養基更換(huan)的(de)(de)(de)次數(shu)。

Innovation & engineering

FGF2-G3，或稱為FGF2-STAB，是由Masaryk大(da)學的(de)(de)Dvorak及其同(tong)事利用計算輔助蛋(dan)(dan)白質(zhi)(zhi)工程(cheng)開發 的(de)(de)，以確定穩定FGF-2的(de)(de)更佳九個氨基酸(suan)替換(huan)。Qkine從Enantis/Masaryk大(da)學獲得了(le)(le)FGF2-G3技術(shu)許(xu)可(ke)，并將該技術(shu)與我們的(de)(de)蛋(dan)(dan)白質(zhi)(zhi)制造專(zhuan)業知(zhi)識(shi)結合(he)起來，制造了(le)(le)一種無(wu)動(dong)物成分、無(wu)載(zai)體蛋(dan)(dan)白、無(wu)His標簽的(de)(de)生長因子，從而實現了(le)(le)從研究到臨床或規模化(hua)應用的(de)(de)轉化(hua)。

Qkine FGF2-G3 產品特色

享受休息日(ri)無(wu)憂的(de)熱(re)穩定FGF2-G3干細胞培養。Qkine的(de)FGF2-G3可以在(zai)不同(tong)的(de)應(ying)用(yong)中替代(dai)野生(sheng)型FGF-2。它可以作(zuo)為常見培養基(ji)配方（包括(kuo)mTeSR、StemPRO和(he)E8）的(de)成分之一，用(yong)于(yu)調節關鍵細胞過(guo)程并維持多能性。

FGF2-G3 的功能與作用(yong)

與德國DZNE合作，研究了(le)FGF2-G3在iPSC培(pei)(pei)養(yang)中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)效果(guo)。使用FGF2-G3的(de)(de)(de)(de)(de)iPSC的(de)(de)(de)(de)(de)穩(wen)定性在培(pei)(pei)養(yang)基中(zhong)(zhong)進行了(le)72小時的(de)(de)(de)(de)(de)檢測，顯(xian)示出增(zeng)強(qiang)的(de)(de)(de)(de)(de)集落健康狀態，維(wei)持(chi)持(chi)續增(zeng)殖狀態，無需每(mei)日(ri)更(geng)換培(pei)(pei)養(yang)基（圖1）。基于多(duo)能(neng)(neng)性標記物Oct4的(de)(de)(de)(de)(de)表(biao)達水(shui)平，FGF2-G3也顯(xian)示出維(wei)持(chi)多(duo)能(neng)(neng)性的(de)(de)(de)(de)(de)能(neng)(neng)力(li)，并減少(shao)了(le)培(pei)(pei)養(yang)基更(geng)換的(de)(de)(de)(de)(de)次數（圖 2）。最(zui)終(zhong)，使用FGF2-G3和休息日(ri)無憂的(de)(de)(de)(de)(de)細胞培(pei)(pei)養(yang)方(fang)法(fa)展示了(le)胚胎體的(de)(de)(de)(de)(de)形成(cheng)（圖3）。

1.在不更換培養基的(de)情(qing)況(kuang)下(xia)，將iPSCs在mTeSR1培養基中(zhong)與(yu)Qkine FGF2-G3共培養3天。

2.在(zai)不更換培(pei)養(yang)基的(de)情(qing)況下，將Oct4+ iPSCs在(zai)mTeSR1培(pei)養(yang)基中與Qkine FGF2-G3共培(pei)養(yang)5天。

3.在不更換(huan)培養基的情(qing)況下，將(jiang)胚胎體在mTeSR1培養基中與Qkine FGF2-G3共培養3天。

Image Credit: Joshua Thomas & Felix Buchner, Deutsches Zentrum für Neurodegenerative Erkrankungen (DZNE), Germany

每個步驟都進(jin)行嚴格的質(zhi)量控制

每個(ge)Qkine蛋白質均在我們獲(huo)得ISO9001:2015認證(zheng)的(de)(de)設(she)施(shi)中(zhong)生(sheng)產，并在整個(ge)過程中(zhong)采取嚴格的(de)(de)質量控(kong)制 措施(shi)。我們對(dui)每個(ge)批(pi)(pi)次使用各(ge)種分析技(ji)術，以確保出(chu)色的(de)(de)質量和(he)批(pi)(pi)次間的(de)(de)一(yi)致性(xing)(xing)。生(sheng)物活(huo)性(xing)(xing)測定和(he)SDS- PAGE凝(ning)膠電泳只是(shi)我們用來(lai)保證(zheng)高度(du)生(sheng)物活(huo)性(xing)(xing)和(he)純(chun)度(du)的(de)(de)一(yi)些技(ji)術之一(yi)。如果您想查(cha)看特定批(pi)(pi)次的(de)(de)完整質量控(kong)制數據，請聯(lian)系(xi)我們獲(huo)取。

FGF2-G3在(zai)還(huan)原(yuan)和非還(huan)原(yuan)條件(jian)下的(de)SDS-PAGE

通過15%（w/v）SDS-PAGE在還原（+β-巰基乙醇，R）和非還原（ NR）條件下分離純化的重組蛋白質（3 μg），并用考馬斯亮藍R250染色。在非還原（NR）條件下，重組FGF2-G3遷移為一個主要的17kDa帶。在還原（R）條件下，只有17kDa的帶可見。未檢測到污染蛋白帶，突顯了蛋白質的純 度。數據來自Qk053批次＃104340。

熱穩定的(de)FGF2-G3在37°C的(de)條件培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)中保持了(le)野生(sheng)型的(de)生(sheng)物活性超過(guo)7天(tian)，這(zhe)使得干細胞培(pei)(pei)養(yang)具有可重(zhong)復 性和均一性，并且無需休息日(ri)更(geng)換培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)。Qkine的(de)每個蛋白質都經過(guo)生(sheng)物活性測試，使用校(xiao)準的(de)熒光素酶報告基(ji)(ji)因分析來(lai)定義感興趣蛋白質的(de)完(wan)整劑量-反應曲線，并確定其(qi)EC50值(zhi)。

FGF2-G3在培養7天(tian)后仍然保持生(sheng)物活性。野生型FGF-2（Qk027）和FGF2-G3（Qk053）在條件培養基中稀釋后， 在37°C下孵育。每天取樣，進行序列稀釋，然后在轉染的HEK293T細胞中進行三重測定。測量了熒光素酶活性， 并進行了對照標準化。

進一步閱讀

Dvorak P, Bednar D, Vanacek P, et al. (2018) Computer-assisted engineering of hyperstable ?broblast growth factor 2. Biotechnol Bioeng. 115(4):850-862.

Kuo HH, Gao X, DeKeyser JM, et al. (2019) Negligible-Cost and Weekend-Free Chemically De?ned Human iPSC Culture. Stem Cell Reports. 14(2):256-270.

Benington L, Rajan G, Locher C, Lim LY. (2020) Fibroblast Growth Factor 2-A Review of Stabilisation Approaches for Clinical Applications. Pharmaceutics. 12(6):508. 

推薦閱讀

產品上新(xin)｜英國(guo)QKine高純(chun)度、高活性、無動物(wu)成(cheng)分的(de)細胞因子