截至目前，相關臨(lin)床(chuang)試驗(yan)取得的(de)進展已證明基(ji)于LV載體的(de)細(xi)(xi)胞(bao)療法的(de)有(you)效性(xing)。提高靶(ba)細(xi)(xi)胞(bao)轉導(dao)效率和減少轉導(dao)LV載體量，是(shi)提高細(xi)(xi)胞(bao)治療有(you)效性(xing)、安(an)全性(xing)和降低成本的(de)重要因素。使用諸(zhu)如LentiBOOST GMP等級LV轉導(dao)增強劑是(shi)有(you)效解決上述難(nan)題的(de)一項可行方案。

LV載體(ti)的(de)(de)(de)包(bao)膜(mo)糖(tang)蛋(dan)白(bai)類型及其特(te)(te)異(yi)性同(tong)樣是影響轉導效率的(de)(de)(de)因素之一。不(bu)同(tong)類型的(de)(de)(de)包(bao)膜(mo)糖(tang)蛋(dan)白(bai)偽(wei)型LV載體(ti)通過與細胞膜(mo)表(biao)面的(de)(de)(de)不(bu)同(tong)受體(ti)結合，促進病(bing)毒黏附和入胞，增強不(bu)同(tong)靶細胞的(de)(de)(de)病(bing)毒轉導效率，而特(te)(te)異(yi)性的(de)(de)(de)包(bao)膜(mo)糖(tang)蛋(dan)白(bai)對陽性表(biao)達特(te)(te)異(yi)性蛋(dan)白(bai)的(de)(de)(de)細胞類型的(de)(de)(de)細胞轉導有(you)積極意義。

以上兩種方案旨在優化(hua)LV轉導(dao)效率，同時使(shi)靶(ba)基(ji)因在細胞內穩定表達。

本文將(jiang)解讀特異性載(zai)體scFV-αEGFR VSV-G/scFV-αCD30 VSV-G和LentiBOOST GMP LV增強(qiang)劑對(dui)細(xi)胞轉導(dao)的積極(ji)意義。

下述研究中，作者對VSV-G包膜糖蛋白進行特異性抗原結合的基因修飾，并成功設計含有針對表面抗原EGFR或CD30的antibody-retargeted lentivirus載體，實現特異性載體與細胞膜之間的高親和力并延長粘附時間，以達到提高轉導效率的目的。

LV載體示意圖見下(xia)圖一：

圖一(yi)：Antibody-retargeted lentivirus載體設計

作者使用(yong)不同比例(li)的scFv-αEGFR-added lentiviral顆粒轉導EGFR+HEK293T細胞，以驗證scFv-αEGFR-added lentiviral的有效性(xing)并優化比例(li)。

當MOI為(wei)(wei)(wei)1時，分別(bie)用(yong)含不同(tong)比例wt-VSV-G（圖二(er)）的(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)基孵(fu)育(yu)HEK293T, (2*105 cells per well) 24h，更(geng)換(huan)新鮮培(pei)(pei)養(yang)基后繼續培(pei)(pei)養(yang)24h。當scFv-αEGFR-VSV-G的(de)(de)比例為(wei)(wei)(wei)33%時，對EGFR+HEK293T細胞(bao)的(de)(de)轉導效率(lv)(lv)為(wei)(wei)(wei)62.3%，約為(wei)(wei)(wei)100.% wt VSV-G轉導效率(lv)(lv)（24.1%）的(de)(de)2.5倍。但(dan)當scFv-αEGFR-VSV-G的(de)(de)比例為(wei)(wei)(wei)100.%時，則(ze)對EGFR+HEK293T的(de)(de)轉導沒有積極作用(yong)。

以上表明，適當(dang)比(bi)例的(de)scFv-αEGFR-VSV-G的(de)LV顆粒能夠有效感(gan)染EGFR+HEK293T細(xi)胞。

圖二（左）：不同比例的wt-lentivirus

圖三(san)（右(you)）：不同比(bi)例的wt- lentivirus對HEK293T的轉導效率

為了驗(yan)證(zheng)antibody-retargeted lentivirus載體(ti)的(de)抗原(yuan)特異性。作者同時使(shi)用(yong)100.% wt- VSV-G和33% scFV-αEGFR VSV-G轉(zhuan)(zhuan)導(dao)(dao)EGFR+ T47D和EGFR-ZR75細(xi)胞(bao)。33% scFV-αEGFR VSV-G對(dui)EGFR-ZR75轉(zhuan)(zhuan)導(dao)(dao)效率低于100.% wt- VSV-G，而(er)對(dui)EGFR+ T47D的(de)轉(zhuan)(zhuan)導(dao)(dao)作用(yong)高于100.% wt- VSV-G，且(qie)scFV-αEGFR VSV-G對(dui)EGFR+ T47D的(de)轉(zhuan)(zhuan)導(dao)(dao)效果顯示出與(yu)EGFR+HEK293T同樣(yang)的(de)趨(qu)勢(shi)（圖四）。

以上結果(guo)說明(ming)antibody-retargeted lentivirus對表(biao)達特異(yi)性抗(kang)原的(de)靶細胞的(de)病毒載體(ti)轉導表(biao)現出積極(ji)作(zuo)用。

圖(tu)四：scFV-αEGFR VSV-G對(dui)EGFR+/EGFR-細胞轉導效率的影(ying)響

基于上(shang)述研究，作(zuo)者優(you)化(hua)了CD30+ lymphoma cells的轉導(dao)方案。分別(bie)使(shi)用100.% wt VSV-G、spinoculation、LentiBOOST、33% scFv-αCD30-VSV-G在不同條件下(xia)轉導(dao)KARPAS-299、SUP-M2和SUDHL-1。

在(zai)(zai)spinoculation條件下(xia)，100.% wt VSV-G和33% scFv-αCD30-VSV-G的(de)對上(shang)述細胞的(de)轉導(dao)效率均增(zeng)高；在(zai)(zai)spinoculation+LentiBOOST條件下(xia)，MOI為10時，33% scFv-αCD30-VSV-G 對KARPAS-299、SUP-M2和SUDHL-1的(de)轉導(dao)效率增(zeng)加至80%以(yi)上(shang)。將MOI從10降(jiang)低至1時，33% scFv-αCD30-VSV-G對上(shang)述細胞的(de)依舊維持較高的(de)轉導(dao)效率（50%~60%）。

由(you)此可(ke)見，spinoculation+LentiBOOST可(ke)在較低(di)(di)的(de)MOI條(tiao)件下維持理想的(de)轉導效率，減少病毒(du)用量，降(jiang)低(di)(di)成本。

此(ci)外，LentiBOOST可有(you)效(xiao)促進100.% wt VSV-G的轉導(dao)，將KARPAS-299的轉導(dao)效(xiao)率從40%提(ti)升到80%，對(dui)SUP-M2和(he)SUDHL-1同樣有(you)不同程度的促轉導(dao)作用。

圖五(wu)：不同(tong)實驗條件下scFv-αCD30-VSV-G的轉導效率

綜上所述，LentiBOOST和(he)特(te)異(yi)性(xing)的(de)antibody-retargeted lentivirus載體對(dui)LV轉(zhuan)導(dao)有積極作(zuo)(zuo)用(yong)。LentiBOOST GMP作(zuo)(zuo)為可用(yong)于臨床研究的(de)LV轉(zhuan)導(dao)增強劑對(dui)靶細胞(bao)無毒性(xing)作(zuo)(zuo)用(yong)，在提高(gao)LV轉(zhuan)導(dao)效率的(de)同(tong)時將VCN值限(xian)定在安(an)全范圍內(nei)。

文(wen)章中用(yong)(yong)到的LentiBOOST是德國Sirion Biotech開(kai)發的一種非(fei)離(li)子性(xing)(xing)、無細(xi)胞毒性(xing)(xing)和(he)非(fei)受(shou)體依賴性(xing)(xing)的Lentivirus轉導(dao)增(zeng)強劑，賦予其與生物膜(mo)和(he)疏水性(xing)(xing)顆粒相互(hu)作用(yong)(yong)的能(neng)力，通過降低細(xi)胞膜(mo)粘稠度、提高(gao)脂(zhi)質交換(huan)和(he)跨膜(mo)轉運，從而提高(gao)慢病毒轉導(dao)細(xi)胞的效率。

目(mu)前該產品在美國和歐洲已(yi)(yi)有(you)(you)(you)30多(duo)個藥物phase Ⅲ/Ⅱ/Ⅰ臨床實驗中(zhong)，并(bing)有(you)(you)(you)相關(guan)藥物已(yi)(yi)上市銷售(shou)，國內已(yi)(yi)有(you)(you)(you)項目(mu)進入臨床Ⅱ期。